ABSTRACT
Resumen La hemofilia B es un trastorno hemorrágico hereditario, ligado al cromosoma X, que se caracteriza por el déficit del factor IX (FIX) de la coagulación. Para mejorar la calidad de vida de los pacientes y la adherencia al tratamiento se han desarrollado concentrados de factores recombinantes modificados para extender su vida media, denominados factores de vida media extendida (EHL: extended half life concentrates). El nonacog beta pegol (N9-GP) es una molécula de FIX humano recombinante glicopegilada que tiene una vida media de 93 h con una sola dosis y ha mostrado un porcentaje de recuperación mayor que otras moléculas. Para diagnosticar y monitorear el tratamiento del paciente hemofílico se determina la actividad del FIX con el ensayo coagulable en una etapa (OSA: one stage assay) y/o en el ensayo cromogénico. El objetivo de este trabajo, realizado en tres centros, fue medir la recuperación de N9-GP con 10 reactivos de APTT diferentes en tres plataformas, en muestras deficientes en FIX adicionadas in vitro con N9-GP, en cuatro niveles de concentración diferentes. Los resultados muestran una heterogeneidad en la actividad de N9-GP medidos por OSA con los diferentes reactivos de APTT cuando se realizaron las calibraciones con el estándar específico de cada coagulómetro. Se obtuvo un porcentaje de recuperación mayor de 92% con Cephascreen, Actin FSL y APTTest elágico en las tres plataformas evaluadas. Estos reactivos serían los únicos apropiados cuando se usa el OSA calibrado con plasma comercial para monitorear el tratamiento de los pacientes que reciben N9-GP.
Abstract Hemophilia B (HB) is an X-linked hereditary bleeding disorder characterised by coagulation factor IX (FIX) deficiency. To improve the quality of life of patients and adherence to treatment, recombinant factor concentrates glicomodified to extend their half-life have been developed. These are called extended half-life factors (EHL: extended half-life concentrates). Nonacog beta pegol (N9-GP) is a glycopegylated recombinant human FIX molecule that has a half-life of 93 h with a single dose and has shown a higher recovery percentage than other molecules. For diagnosis and monitoring the treatment of hemophiliac patients, FIX activity is determined with the One Stage Clotting Assay (OSA) and/or the chromogenic assay. The objective of this work, carried out in three centres, was to measure the recovery of N9-GP with 10 different APTT reagents on three platforms, in FIX deficient samples spiked in vitro with N9-GP, at four different concentration levels. The results show a heterogeneity in the activity of N9-GP measured by OSA with the different APTT reagents when the calibrations were performed with the specific standard of each coagulometer. A recovery percentage greater than 92% was obtained with Cephascreen, Actin FSL and APTTest ellagic in the three platforms evaluated. These reagents would be the only ones appropriate when using the commercial plasma-calibrated OSA to monitor the treatment of patients treated with N9-GP.
Resumo A hemofilia B é uma doença hemorrágica hereditária ligada ao cromossomo X caracterizada pela deficiência do fator de coagulação IX (FIX). Para melhorar a qualidade de vida dos pacientes e a adesão ao tratamento, foram desenvolvidos concentrados de fatores recombinantes modificados para prolongar sua meia-vida, chamados de fatores de meia-vida estendida (EHL: extended half life concentrates). Nonacog beta pegol (N9-GP) é uma molécula de FIX humano recombinante glicopeguilada que tem meia-vida de 93 h com uma dose única e mostrou uma porcentagem de recuperação maior do que outras moléculas. Para diagnosticar e monitorar o tratamento de pacientes hemofílicos, a atividade do FIX é determinada com o ensaio coagulável em um estágio (OSA: One Stage Assay) e/ou o ensaio cromogênico. O objetivo deste trabalho, realizado em três centros, foi medir a recuperação de N9-GP com 10 reagentes de APTT diferentes em três plataformas, em amostras deficiente de fator IX adicionadas in vitro com N9-GP, em quatro níveis de concentração diferentes. Os resultados mostram uma heterogeneidade na atividade de N9-GP medidos por OSA com os diferentes reagentes de APTT quando as calibragens foram realizadas com o padrão específico de cada coagulômetro. Uma porcentagem de recuperação superior a 92% foi obtida com Cephascreen, Actin FSL e APTTest elágico nas três plataformas avaliadas. Esses reagentes seriam os únicos apropriados ao usar o OSA calibrado com plasma comercial para monitorar o tratamento de pacientes tratados com N9-GP.
ABSTRACT
El objetivo de este trabajo fue realizar la validación analítica del método cromogénico (FVIII:Ccro) en la plataforma ACL TOP y correlacionarlo con el método coagulable en una etapa (FVIII:Ccoag). El estudio de validación (EP5-A2, EP6-A2 y comparación de métodos por EP-9) se realizó para la curva de rango normal-bajo (CRNB): aproximadamente entre 10-150 UI/dL de FVIII y de rango muy bajo (CRMB): aproximadamente entre 0-10 UI/dL. Los resultados de repetitividad (CVr) y precisión intermedia (CVi) fueron menores del 6% y comparables a los informados por el fabricante para otras plataformas. El rango de medición analítica fue de 11-129 UI/dL con CRNB, y se extrapoló a 0,3 UI/dL al utilizar la CRMB. Para la CRNB FVIII:Ccro mostró buena correlación con FVIII:Ccoag: r: 0,98, pendiente: 0,982 (0,961-1,003), ordenada al origen: -0,3 (-1,1-0,5), sesgo: -2,0%. Para CRMB se obtuvo un r de 0,96, pendiente: 0,921 (0,855-0,988), ordenada al origen: -0,07 (-0,35-0,20), sesgo: -10,2%. Sólo 4 pacientes presentaron niveles discrepantes entre ambos métodos. La determinación de FVIII:C por el método cromogénico automatizado en la familia ACL TOP fue comparable con FVIII coagulable en una etapa en el rango analítico evaluado. El FVIII:Ccro automatizado puede utilizarse para el diagnóstico y seguimiento del tratamiento de los pacientes hemofílicos.
The objective of this work was to perform the analytical validation of the chromogenic method (FVIII:Ccro) on the ACL TOP platform correlating with one stage assay (FVIII:Ccoag). The validation study (EP5-A2, EP6-A2 and comparison of methods by EP-9) was performed for the low-normal range curve (CRNB): approximately between 10-150 IU/dL of FVIII and very low range (CRMB): approximately between 0-10 IU/dL. The results of CVr (repeatability) and CVi (intermediate precision) were lower than 6% and comparable to those reported by the manufacturer for other platforms. The analytical measurement range was 11-129 IU/dL, extrapolated to 0.3 IU/dL using the CRMB. For CRNB FVIII:Ccro showed good correlation with FVIII:Ccoag: r: 0.98, slope: 0.982 (0.961-1.003), intercept: -0.3 (-1.1-0.5), bias: -2.0%. For CRMB: r: 0.96 was obtained, pending: 0.921 (0.855-0.988), intercept: -0.07 (-0.35-0.20), bias: -10.2%. Only 4 patients presented discrepant levels between both methods. The automated chromogenic FVIII assay in the ACL TOP family is comparable with one stage coagulable FVIII in the analytical range studied. The FVIII:Ccro automated can be used for the diagnosis and monitoring of the treatment of hemophilic patients.
O objetivo deste trabalho foi a validação analítica do método cromogênico (FVIII:Ccro) na plataforma ACL TOP correlacionando-se com o método coagulável numa etapa (FVIII:Ccoag). O estudo de validação (EP5-A2, EP6-A2 e comparação de métodos por EP-9) foi realizado para a curva de faixa normal-baixa (CRNB) aproximadamente entre 10 e 150 Ul/dL de FVIII e de faixa muito baixa (CRMB): aproximadamente entre 0 e 10 UI/dL. Os resultados de Repetitividade (CVr) e precisão intermediária (CVi) foram inferiores a 6% e comparáveis aos descritos pelo fabricante para outras plataformas. A faixa de medição analítica foi de 11-129 UI/dL com CRNB extrapolando-se para 0,3 UI/dL utilizando a CRMB. Para a CRNB FVIII:Ccro houve boa correlação com o FVIII: Ccoag: r: 0,98, inclinação: 0,982 (0,961-1,003), ordenada na origem: -0,3 (-1,1-0,5), Viés: -2,0%. Para CRMB: foi obtido um r: 0,96, pendente: 0,921 (0,855-0,988), ordenado na origem: -0,07 (-0,35-0,20), Viés: -10,2%. Apenas quatro pacientes apresentaram níveis discrepantes entre os dois métodos. A determinação de FVIII:C pelo método cromogênico automatizado na família ACL TOP foi comparável ao FVIII coagulável em um estágio na faixa analítica avaliada. FVIII: O FVIII:Ccro automatizado pode ser utilizado para o diagnóstico e seguimento do tratamento dos pacientes hemofílicos.